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4数字病理学幻灯片扫描提示

您想从玻璃幻灯片上获得更好的数字图像吗?以下是帮助您获得最佳数字病理线扫描仪的提示:

技巧1:组织准备

具有良好准备的组织至关重要 - 最好的数字扫描仪无法弥补差的样品。以下是组织制剂的一些方面,可以影响数字化过程。

  1. 切-数字病理扫描仪的聚焦范围比传统显微镜小,所以要记住这一点。当扫描单面图像时,标准组织厚度(3 - 5 μm)将得到最好的结果。对于厚截面,可能需要进行多平面(z-stack)扫描。
  2. 染色 - 非常微弱的染色或过度背景染色将使扫描仪自动识别组织更加困难,并且可能意味着更多手动工作。
  3. 安装-与传统显微镜一样,数字病理扫描仪在扁平的组织表面工作得最好。避免褶皱或皱纹在组织最佳焦点。
  4. 覆盖物-如果你计划扫描载玻片,最好使用玻璃覆盖物,因为塑料覆盖物可能会随着时间变形,影响扫描仪的焦点。与传统的显微镜一样,确保盖子下没有气泡,以防止扫描区域失焦。

提示2:幻灯片检查和准备

为了提高幻灯片的效果,在扫描之前一定要检查和清理幻灯片。

  1. 检查载玻片是否悬垂标签、胶带或可能影响载玻片在扫描机构中的配合并妨碍操作的过量安装介质。
  2. 用软布(如超细纤维)小心擦拭滑块,以清除滑块上下表面的松散碎片、水渍或指纹。对于难以清洗的污渍,请用水或酒精溶液将布沾湿后清洗。
  3. 检查滑块是否有裂缝或碎片,特别是在滑块的角落。任何松动的玻璃碎片都可能在扫描过程中脱落,损坏扫描机构。
  4. 等到玻片完全干燥后再装入扫描仪,以避免残留在扫描仪上。
  5. 确保幻灯片放入扫描仪架或载体中,并且任何固定机构接合。如果扫描过程中幻灯片不齐平,则扫描中的未聚焦区域很高。滑动底部的标签可以防止滑动剥落平面,因此确保这些仅放置在滑动件的顶面侧。

提示3:扫描幻灯片

每个数字病理学扫描仪模型都有自己的工作流程和要求。但是,有一些普遍的指导方针是为了获得良好的扫描。

  1. 扫描仪应自动检测幻灯片上的所有组织,同时排除非相关对象,如标签,笔标记或碎片。然而,微弱的组织染色,过度背景染色,安装介质变色或载玻片上过度的碎屑/标记可能导致组织检测不良。如果可能的话,在高分辨率扫描之前审查对次优载玻片上的组织检测,以避免以后对重新扫描的需求。
  2. 聚焦应该是自动的,而且焦点——如果有的话——应该均匀地分布在组织上。如果幻灯片的区域没有扫描到焦点,尝试手动放置额外的焦点。
  3. 避免将焦点放在盖玻片,气泡或其他缺陷下的碎片的区域上。这些可能导致扫描仪聚焦在不正确的扫描平面上,导致焦点超焦组织。
  4. 对于较高放大倍率的油扫描,确保在扫描之前施加足够的油,以防止在扫描过程中的客观干燥,这可以在扫描图像上留下“条纹”伪影。然而,太多的油可以在盖子滑动下渗透,留下“釉面”外观,沿着细胞边缘较差的扫描。测试扫描是储油的良好实践。务必在扫描后清理机架或扫描机制上的任何油渣。

提示4:质量控制(QC)

不管你怎么努力,不是每一次扫描都可以接受。每个实验室的QC流程会有所不同,你应该始终遵循机构的QC要求。然而,这里有一些步骤,您可以遵循快速和有效的扫描QC在您的图像查看器。

  1. 在低放大率(如4x)下检查整个幻灯片,或至少检查整个被扫描的组织区域,检查是否有可见的焦外区域或不对中。失调将典型地在图像中显示为一条“缝线”,构成完整图像的扫描条纹在这里相遇。
  2. 缩小捕获高分辨率图像的放大率,并在其最宽点的组织部分的单个水平路径中审查,一次视场。这将允许您检查焦点或副列机未对准的较小区域。
  3. 在垂直方向上,从组织的一个边缘到另一个边缘进行同样的逐场复查,以一条不间断的线,再次检查任何焦点外的区域。
  4. 点在高倍率下检查滑块中的几个区域,特别是组织是不同厚度的区域,或者在滑动中存在任何缺陷的区域。这些领域最有可能具有较差的焦点。

扫描时遵循这些简单的指导原则,帮助您生成更高质量的数字图像,并为您提供可以查看、分享和分析的幻灯片永久记录。